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Développement d’enzymes efficaces par évolution dirigée
La capacité analytique à très haut débit des microfluidiques à base de gouttelettes permet de cribler l’activité de millions de variantes d’enzymes en une seule journée et de sélectionner les molécules ayant le taux catalytique le plus élevé. Grâce à cette technologie, nous concevons des procédures d’évolution dirigée dans lesquelles des cycles de mutagénèse et de criblage à très haut débit sont effectués pour identifier rapidement des enzymes très efficaces en fonction de leur capacité de renouvellement. Nous avons démontré l’efficacité de ce schéma de sélection en sélectionnant des mutants du ribozyme à motif X offrant un kcat 30 fois plus élevé tout en ne souffrant plus d’inhibition du produit.
Flux de travail typique de criblage assisté par microfluidique utilisé pour sélectionner de rares catalyseurs améliorés contenus dans une bibliothèque de mutants.
Publication sélectionnée :
- Ryckelynck M., Baudrey S., Rick C., Marin A., Coldren F., Westhof E., Griffiths A.D. (2015). Using droplet-based microfluidics to improve the catalytic properties of RNA under multiple-turnover conditions. RNA, 21, 458-469.
- Autour A., Ryckelynck M. (2017). Ultrahigh-Throughput Improvement and Discovery of Enzymes Using Droplet-Based Microfluidic Screening. Micromachines, 8(4), 128.
