Intranet
Acces
Contact
Transgénèse chez le moustique
La transgénèse Drosophila a permis de comprendre de nombreux aspects de la biologie de la mouche des fruits, permettant la surexpression du gène d’intérêt – de manière spécifique et temporelle grâce au système Gal4 / UAS et à ses raffinements-; la mutagenèse à médiation transposon pour la découverte de gènes clés des joueurs dans un processus biologique donné; l’expression de protéines d’intérêt fusionné à des journalistes tels que la protéine fluorescente verte (GFP) pour suivre leur destin cellulaire; manipulations génétiques fines telles que knock-out de gène; gène ciblé knockdown par ARNi transgénique …
De même, on peut s’attendre à ce que la transgénèse aide à démêler les processus clés dans la biologie des anophèles, y compris celui des interactions vecteur / plasmodium. Ainsi, nous sommes particulièrement désireux d’exploiter la transgénèse d’Anopheles pour répondre à nos questions biologiques. À l’avenir, les moustiques transgéniques pourraient même aider à lutter contre le paludisme, car la transgénèse pourrait également être utilisée pour rendre les moustiques résistants aux parasites Plasmodium ou dans des stratégies visant à réduire les populations de moustiques vecteurs, comme la technique des insectes stériles.
Nous sommes intéressés à explorer le potentiel de tous ces aspects de la transgenèse des moustiques. Par conséquent, nous avons travaillé dur pour établir A.gambiae transgenèse dans notre laboratoire et sont maintenant capables de produire des moustiques transgéniques de façon routinière. Les facteurs clés de ce succès étaient l’optimisation de chaque étape de la transgénèse médiée par le transposon; la mise en place de lignes attP docking robustes pour la transgénèse médiée par le phage PhiC31 et la construction de plasmides auxiliaires efficaces; l’utilisation du tri larvaire automatisé pour distinguer les larves de moustiques transportant 0, 1 ou 2 copies d’un transgène donné afin de générer rapidement des lignées homozygotes stables et de surveiller la stabilité ultérieure du transgène; et l’utilisation de multiples marqueurs de sélection de transgénèse pour gagner du temps en générant simultanément plusieurs lignées transgéniques distinctes.
Avec ces outils à portée de main, nous sommes en train de (i) tester l’effet de divers transgènes sur les résultats d’une infection à Plasmodium; (ii) l’établissement d’une mutagenèse ciblée du génome de Anopheles gambiae en utilisant des endonucléases synthétiques TALEN; (iii) la mise en place de protocoles automatisés pour générer de grandes populations de moustiques porteurs des transgènes désirés, ou des populations de moustiques non sexuées ne portant aucun transgène. Les populations mâles pures obtenues de cette manière peuvent être utilisées dans des TIS ou dans des programmes d’intervention de remplacement de population, visant à augmenter la fréquence des moustiques résistants aux maladies dans la population générale des moustiques.
À l’avenir, nous explorerons plus avant comment la transgenèse peut aider à obtenir des moustiques mutants (mais non transgéniques) incapables de transmettre la maladie. Par exemple, apporter de petites modifications aux protéines de moustiques dont Plasmodium a besoin pour coloniser son vecteur pourrait rendre le vecteur résistant au Plasmodium. Les transgènes utilisés pour obéir à ces modifications génétiques peuvent être ensuite éliminés par des croisements génétiques et la sélection, et les lignées mutantes non transgéniques, résistantes aux maladies obtenues peuvent être évaluées pour des stratégies d’intervention de remplacement de population.
